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一、試驗原理

      細(xì)胞劃痕法是簡捷測定細(xì)胞遷移運動和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的*區(qū)域劃線，去除*部分細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至試驗設(shè)定時間，觀察周邊細(xì)胞是否遷移至*劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力。試驗通常需設(shè)定對照組和供試品組，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同可以判斷供試品遷移與修復(fù)能力。

二、適用對象

      包括加了某種處理因素、藥物、重組蛋白、外源性基因、生長因子等供試品。

三、試驗步驟

1）所有使用的器具均需要滅菌，包括直尺和marker筆在使用前需要放在潔凈臺內(nèi)用紫外燈照射30min以上；

2）用marker筆比著直尺在6孔板背后每孔橫向和縱向各三等份劃線做記號，按照5×105cell/孔接種細(xì)胞，具體數(shù)量可根據(jù)細(xì)胞不同而調(diào)整，目標(biāo)以過夜能達(dá)到95%以上匯合率為宜；

3）細(xì)胞培養(yǎng)24h后用10μL槍頭比著直尺對準(zhǔn)孔板，輕推橫向、縱向劃線形成劃痕，用PBS漂洗細(xì)胞3次，去除劃掉的細(xì)胞；

4）在對照組和供試品組孔中加入無血清培養(yǎng)基配制的供試品和對照樣品，空白對照組只加入無血清培養(yǎng)基；

5）轉(zhuǎn)移至37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，于0h、24h時，以橫向和縱向的交點為核心，在顯微鏡下拍照；

注1：在用PBS緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細(xì)胞，影響試驗拍照結(jié)果。

注2：一般做劃痕試驗，都是無血清或者低血清(<2%），否則細(xì)胞增殖就不能忽略。

注3：不同孔之間較好用同一個槍頭。

四、數(shù)據(jù)統(tǒng)計

      測量劃痕區(qū)面積，通過固定劃痕區(qū)移行細(xì)胞的總面積除以固定劃痕區(qū)初始面積，計算每組細(xì)胞遷移率。

試驗示例

1.試驗材料

3. 試驗結(jié)果

對照組-0h	對照組-24h
對照組-48h	對照組-72h
試驗組-0h	試驗組-24h
試驗組-48h	試驗組-72h

注：如果長時間觀察時，需考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果，而不是單純的細(xì)胞遷移，如果要單純的考慮細(xì)胞遷移，先用絲裂霉素（1 μg/mL）處理一小時，抑制細(xì)胞的分裂。另外，使用無血清培養(yǎng)基也可以降低細(xì)胞增殖對實驗結(jié)果的影響，但同時由于細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會有所改變。